最近,亲子鉴定检测中心报道:澳大利亚西澳大学的研究人员开发出一种新的荧光技术,能克服上述问题,准确测定蛋白巯基的氧化状态。他们通过荧光酶标仪可靠地测定蛋白巯基氧化状态的整体微小变化,随后通过SDS-PAGE检测特定蛋白的氧化状态。
氧化应激是由自由基在体内产生的一种负面作用,并被认为是导致衰老和疾病的一个重要因素。他们开发出的这种新技术能改善蛋白溶解,并避免样品中蛋白被认为氧化。在溶解步骤,还原型巯基被标上绿色荧光的BODIPY FL马来酰亚胺。在去除了过量的BODIPY FL马来酰亚胺之后,剩余的氧化型蛋白巯基被TCEP还原。随后这种新生成的还原型氧化巯基与红色荧光的Texas Red马来酰亚胺相互作用,并去除多余的染料。
由于BODIPY FL and Texas Red 荧光基团显示出极少的荧光发射重叠,因此,利用这两种荧光染料标记蛋白能够实现同一个样品中氧化性和还原型蛋白巯基的定量测定,所需的仪器只是一台荧光酶标仪。通过测定氧化型和还原型蛋白巯基,研究人员能够检测到生物样品的微小差异。这种双标记技术还能检测特定蛋白的巯基氧化状态。通过SDS-PAGE和荧光凝胶扫描仪,就能了解特定蛋白巯基的氧化状态。
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王主任
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